Geçen hafta selüloz asetat membran elektroforezinin kullanımına ilişkin birkaç hususu paylaşmıştık ve bu konuyu referans olarak bugün burada bitireceğiz.
Seçimi Tampon Konsantrasyonu
Selüloz asetat membran elektroforezinde kullanılan tampon konsantrasyonu genellikle kağıt elektroforezinde kullanılandan daha düşüktür. Yaygın olarak kullanılan pH 8,6Bhakem tamponu tipik olarak 0,05 mol/L ila 0,09 mol/L aralığında seçilir. Konsantrasyonu seçerken bir ön tespit yapılır. Örneğin, elektroforez odasındaki elektrotlar arasındaki membran şeridinin uzunluğu 8-10 cm ise, membran uzunluğunun santimetresi başına 25V'luk bir voltaj gerekir ve akım şiddeti, membran genişliğinin santimetresi başına 0,4-0,5 mA olmalıdır. Elektroforez sırasında bu değerlere ulaşılmazsa veya aşılmazsa tampon konsantrasyonu artırılmalı veya seyreltilmelidir.
Aşırı derecede düşük bir tampon konsantrasyonu, bantların hızlı hareket etmesine ve bant genişliğinde bir artışa neden olacaktır. Öte yandan, aşırı derecede yüksek bir tampon konsantrasyonu, bant geçişini yavaşlatacak ve belirli ayırma bantlarının ayırt edilmesini zorlaştıracaktır.
Selüloz asetat membran elektroforezinde akımın önemli bir kısmının numune üzerinden iletildiği ve bunun önemli miktarda ısı ürettiğine dikkat edilmelidir. Bazen seçilen tampon konsantrasyonunun uygun olduğu düşünülebilir. Bununla birlikte, ortam sıcaklığının arttığı koşullar altında veya daha yüksek voltaj kullanıldığında, ısı nedeniyle suyun buharlaşması yoğunlaşabilir, bu da aşırı yüksek tampon konsantrasyonuna ve hatta membranın kurumasına neden olabilir.
Örnek Hacmi
Selüloz asetat membran elektroforezinde numune hacminin miktarı, elektroforez koşulları, numunenin özellikleri, boyama yöntemleri ve tespit teknikleri dahil olmak üzere çeşitli faktörler tarafından belirlenir. Genel prensip olarak, tespit yöntemi ne kadar hassas olursa numune hacmi o kadar küçük olabilir ve bu da ayırma açısından avantajlıdır. Numune hacmi aşırıysa elektroforetik ayırma modelleri net olmayabilir ve boyama da zaman alıcı olabilir. Bununla birlikte, ayrılmış boyalı bantlar elüsyon kolorimetrik tespit yöntemleri kullanılarak niceliksel olarak analiz edilirken, numune hacmi çok küçük olmamalıdır; çünkü bu, belirli bileşenler için daha düşük absorbans değerlerine yol açarak içeriklerinin hesaplanmasında daha yüksek hatalara yol açabilir. Bu gibi durumlarda numune hacmi uygun şekilde artırılmalıdır.
Tipik olarak numune uygulama hattının her santimetresine eklenen numune hacmi 0,1 ila 5 µL arasında değişir ve bu da 5 ila 1000 µg numune miktarına eşdeğerdir. Örneğin rutin serum protein elektroforezi analizinde uygulama hattının her santimetresine eklenen örnek hacmi genellikle 1 μL'yi geçmez, bu da 60 ila 80 μg proteine eşdeğerdir. Bununla birlikte, aynı elektroforez yöntemini kullanarak lipoproteinleri veya glikoproteinleri analiz ederken numune hacminin buna uygun olarak arttırılması gerekir.
Sonuç olarak, bir dizi ön deneyle belirli koşullara göre en uygun numune hacmi seçilmelidir.
Boyama Solüsyonunun Seçimi
Selüloz asetat membran elektroforezinde ayrılan bantlar tipik olarak tespit edilmeden önce boyanır. Farklı numune bileşenleri, farklı boyama yöntemleri gerektirir ve selüloz asetat membran elektroforezi için uygun boyama yöntemleri, filtre kağıdına tamamen uygulanamayabilir.
Boyama çözümünü seçmenin üç ana ilkesi vardır:selüloz asetat membranı. İlk önce,Membran büzülmesini ve boyama solüsyonunun neden olduğu deformasyonu önlemek için alkolde çözünen boyalara göre suda çözünebilen boyalar tercih edilmelidir. Boyama sonrasında membranın su ile durulanması ve boyama süresinin en aza indirilmesi önemlidir. Aksi takdirde membran kıvrılabilir veya büzüşebilir ve bu da daha sonraki tespitleri etkileyebilir.
İkinci olarak numune için güçlü boyama afinitesine sahip boyaların seçilmesi tercih edilir. Serum proteinlerinin selüloz asetat membran elektroforezinde, çeşitli serum protein bileşenlerine karşı güçlü boyama afinitesi ve stabilitesi nedeniyle amino siyahı 10B yaygın olarak kullanılır.
Üçüncüsü güvenilir kaliteli boyalar seçilmelidir. Bazı boyalar, aynı ada sahip olmalarına rağmen, boyama sonrasında özellikle koyu bir arka plana neden olan yabancı maddeler içerebilir. Bu, başlangıçta iyi ayrılmış bantları bile bulanıklaştırabilir ve ayırt edilmelerini zorlaştırabilir.
Son olarak, boyama çözeltisi konsantrasyonunun seçimi önemlidir. Teorik olarak, daha yüksek bir boyama çözeltisi konsantrasyonunun, numune bileşenlerinin daha kapsamlı bir şekilde boyanmasına ve daha iyi boyama sonuçlarına yol açacağı düşünülebilir. Ancak durum böyle değil. Numune bileşenleri ile boya arasındaki bağlanma afinitesinin belirli bir sınırı vardır ve boyama çözeltisi konsantrasyonunun artmasıyla artmaz. Aksine, aşırı yüksek boyama solüsyonu konsantrasyonu sadece boyanın israfına yol açmakla kalmaz, aynı zamanda net bir arka plan elde edilmesini de zorlaştırır. Üstelik renk yoğunluğu belirli bir maksimum değere ulaştığında, özellikle kantitatif ölçümlerde boyanın absorbans eğrisi doğrusal bir ilişki izlemez. Selüloz asetat membran elektroforezinde boyama çözeltisi konsantrasyonu genellikle kağıt elektroforezinde kullanılandan daha düşüktür.
Pekin Liuyi Biyoteknolojisi hakkında bilinmesi gereken ayrıntılar's selüloz asetat membranıelektroforez tankı ve elektroforez uygulaması için lütfen burayı ziyaret edin:
benSelüloz Asetat Membranı ile serum proteinini ayırma deneyi
benSelüloz Asetat Membran Elektroforezi
benSelüloz Asetat Membran Elektroforezi Kullanılırken Bazı Hususlar Akılda Tutulmalıdır (1)
Ürünlerimiz için herhangi bir satın alma planınız varsa lütfen bizimle iletişime geçmekten çekinmeyin. Bize e-posta yoluyla mesaj gönderebilirsiniz[e-posta korumalı]veya[e-posta korumalı]veya lütfen +86 15810650221 numaralı telefondan bizi arayın veya +86 15810650221 numaralı Whatsapp'ı veya Wechat: 15810650221'i ekleyin.
Referans:Bay Li'nin Elektroforezi (İkinci Baskı)
Gönderim zamanı: Haz-06-2023