Poliakrilamid jel elektroforezi nedir?

Poliakrilamid Jel Elektroforezi

Jel elektroforezi, biyolojik disiplinlerdeki laboratuvarlarda DNA, RNA ve proteinler gibi makromoleküllerin ayrılmasına izin veren temel bir tekniktir. Farklı ayırma ortamları ve mekanizmaları, bu moleküllerin alt kümelerinin, fiziksel özelliklerinden yararlanılarak daha etkili bir şekilde ayrılmasına olanak tanır. Özellikle proteinler için poliakrilamid jel elektroforezi (PAGE) sıklıkla tercih edilen tekniktir.

PAGE, proteinler gibi makromolekülleri elektroforetik hareketliliklerine, yani analitlerin zıt yüklü bir elektrota doğru hareket etme yeteneğine göre ayıran bir tekniktir. PAGE'de bu, molekülün yüküne, boyutuna (molekül ağırlığı) ve şekline göre belirlenir. Analitler poliakrilamid jelde oluşan gözeneklerden geçer. DNA ve RNA'dan farklı olarak proteinlerin yükü, dahil oldukları amino asitlere göre değişir ve bu da onların çalışma şeklini etkileyebilir. Amino asit dizileri aynı zamanda görünen boyutlarını ve dolayısıyla gözeneklerde nasıl hareket edebildiklerini etkileyen ikincil yapılar da oluşturabilir. Bu nedenle, boyutun daha doğru bir tahmini gerekiyorsa bazen proteinleri doğrusallaştırmak için elektroforezden önce proteinlerin denatüre edilmesi istenebilir.

GBF SAYFASI

Sodyum-dodesil sülfat poliakrilamid jel elektroforezi, kütleleri 5 ila 250 kDa olan protein moleküllerini ayırmak için kullanılan bir tekniktir. Proteinler yalnızca moleküler ağırlıklarına göre ayrılır. Anyonik bir yüzey aktif madde olan sodyum dodesil sülfat, protein örneklerinin içsel yüklerini maskeleyen ve onlara benzer bir yük/kütle oranı veren jellerin hazırlanmasına eklenir. Basit bir ifadeyle proteinleri denatüre eder ve onlara negatif yük verir.

Yerel SAYFA

Native PAGE, proteinlerin ayrılması için denatüre olmayan jellerin kullanıldığı bir tekniktir. SDS PAGE'den farklı olarak jellerin hazırlanmasında hiçbir denatüre edici madde eklenmez. Sonuç olarak proteinlerin ayrılması, proteinlerin yüküne ve boyutuna göre gerçekleşir. Bu teknikte proteinlerin konformasyonu, katlanması ve amino asit zincirleri ayırmanın bağlı olduğu faktörlerdir. Proteinler bu süreçte zarar görmez ve ayırma işlemi tamamlandıktan sonra geri kazanılabilir.

Poliakrilamid jel elektroforezi (PAGE) nasıl çalışır?

PAGE'in temel prensibi, analitleri bir elektrik akımı kullanarak poliakrilamid jelin gözeneklerinden geçirerek ayırmaktır. Bunu başarmak için bir akrilamid-bisakrilamid karışımı, amonyum persülfat (APS) ilavesiyle polimerize edilir (poliakrilamid). Tetrametiletilendiamin (TEMED) tarafından katalize edilen reaksiyon, analitlerin içinden geçebileceği gözeneklere sahip ağ benzeri bir yapı oluşturur (Şekil 2). Jelin içerdiği toplam akrilamid yüzdesi ne kadar yüksek olursa, gözenek boyutu o kadar küçük olur, dolayısıyla içinden geçebilecek proteinler de o kadar küçük olur. Akrilamidin bisakrilamide oranı da gözenek boyutunu etkileyecektir ancak bu genellikle sabit tutulur. Daha küçük gözenek boyutları aynı zamanda küçük proteinlerin jel içinde hareket etme hızını da azaltır, çözünürlüklerini artırır ve akım uygulandığında hızla tampona doğru akmalarını önler.

Poliakrilamid Jel Elektroforezi Ekipmanları

Jel Elektroforez Hücresi (Tank/Bölme)
Poliakrilamid jel elektroforezi (PAGE) için jel tankı, agaroz jel tankından farklıdır. Agaroz jel tankı yatay, PAGE tankı ise dikeydir. Dikey elektroforez hücresi (tank/bölme) ile iki cam plaka arasına ince bir jel (normalde 1,0 mm veya 1,5 mm) dökülür ve jelin alt kısmı bir bölmedeki tampona batırılacak ve üst kısmı tampona batırılacak şekilde monte edilir. başka bir odada. Akım uygulandığında, az miktarda tampon jelin içinden üst bölmeden alt bölmeye doğru hareket eder. Düzeneğin dik konumda kalmasını garanti eden güçlü kelepçelere sahip ekipman, eşit soğutmayla hızlı jel akışını kolaylaştırır ve farklı bantlar elde edilir.

Beijing Liuyi Bioteknoloji Co., Ltd. (Liuyi Biyoteknoloji), çeşitli boyutlarda poliakrilamid jel elektroforez hücreleri (tanklar/bölmeler) üretmektedir. DYCZ-20C ve DYCZ-20G modelleri, DNA dizileme analizine yönelik dikey elektroforez hücreleridir (tanklar/bölmeler). DYCZ-24DN, DYCZ-25D ve DYCZ-25E modeli gibi dikey elektroforez hücrelerinden bazıları (tanklar/bölmeler) kurutma sistemiyle uyumludur; Western Blotlama sistemi modeli DYCZ-40D, DYCZ-40G ve DYCZ-40F ile uyumludur. protein molekülünün jelden membrana aktarılmasında kullanılır. SDS-PAGE elektroforezinden sonra Western Blot, bir protein karışımındaki spesifik bir proteini tespit etmeye yönelik bir tekniktir. Bu kurutma sistemlerini deneysel gereksinimlere göre seçebilirsiniz.

Elektroforez Güç Kaynağı
Jeli çalıştıracak elektriği sağlamak için bir elektroforez güç kaynağına ihtiyacınız olacaktır. Liuyi Biyoteknoloji olarak tüm uygulamalar için çeşitli elektroforez güç kaynakları sağlıyoruz. Yüksek kararlı voltaj ve akıma sahip DYY-12 ve DYY-12C modeli, yüksek voltaj gereksinimi elektroforezini karşılayabilir. Stand, zamanlama, VH ve adım adım uygulama işlevine sahiptir. IEF ve DNA dizileme elektroforezi uygulaması için idealdirler. Genel protein ve DNA elektroforezi uygulaması için, aynı zamanda elektroforez hücreli (tanklar/bölmeler) sıcak satış güç kaynakları olan DYY-2C, DYY-6C, DYY-10 vb. modellerimiz mevcuttur. Bunlar, okul laboratuvarı, hastane laboratuvarı vb. gibi orta ve düşük voltajlı elektroforez uygulamaları için kullanılabilir. Güç kaynakları için daha fazla model için lütfen web sitemizi ziyaret edin.

Liuyi markasının Çin'de 50 yılı aşkın bir geçmişi vardır ve şirket dünyanın her yerinde istikrarlı ve yüksek kaliteli ürünler sunabilmektedir. Yılların gelişimi sayesinde seçiminize değer!

Hakkımızda daha fazla bilgi için lütfen e-posta yoluyla bizimle iletişime geçin[e-posta korumalı] or [e-posta korumalı].

Referanslar Poliakrilamid jel elektroforezi nedir?
1. Karen Steward PhD Poliakrilamid jel elektroforezi, Nasıl Çalışır, Teknik Çeşitleri ve Uygulamaları