Deney Prensibi
Hemoglobin elektroforezi, çeşitli normal ve anormal hemoglobinleri tespit etmeyi ve doğrulamayı amaçlar.
Farklı hemoglobin türlerinin farklı yükleri ve izoelektrik noktaları nedeniyle, belirli bir pH tampon çözeltisinde, hemoglobinin izoelektrik noktası tampon çözeltisinin pH'ından düşük olduğunda, hemoglobin negatif bir yük taşır ve elektroforez sırasında anoda doğru göç eder. Tersine, pozitif yüklü hemoglobin katoda doğru hareket eder.
Belirli bir voltaj altında ve belirli bir elektroforez süresinden sonra, farklı yüklere ve molekül ağırlıklarına sahip hemoglobinler, farklı göç yönleri ve hızları sergiler. Bu, farklı bölgelerin ayrılmasına olanak tanır ve çeşitli hemoglobinleri ölçmek için bu bölgeler üzerinde daha sonra kolorimetrik veya elektroforetik tarama analizi gerçekleştirilebilir. En sık kullanılan yöntem pH 8,6 selüloz asetat membran elektroforezidir.
Sitoplazmada, glikojen veya polisakkarit maddelerde (mukopolisakkaritler, mukoproteinler, glikoproteinler, glikolipitler vb.) bulunan etilen glikol grupları (CHOH-CHOH), periyodik asit tarafından oksitlenir ve aldehit gruplarına (CHO-CHO) dönüştürülür. Bu aldehit grupları, renksiz morumsu-kırmızı Schiff reaktifi ile birleşerek hücrede polisakkaritlerin bulunduğu yerde biriken mor-kırmızı bir boya oluşturur. Bu reaksiyon, daha önce glikojen boyaması olarak adlandırılan periyodik asit-Schiff (PAS) boyaması olarak bilinir.
Deney Yöntemi
Malzemeler:Selüloz asetathatırabrane, elektroforez aparatı(DYCP-38C ve güç kaynağı DYY-6C), Üstün Numune Yükleme Aracı(pipet), spektrofotometre, kolorimetrik küvetler, tamponlar.
Tampon:
(1) pH 8,6 TEB Tamponu: 10,29 g Tris, 0,6 g EDTA, 3,2 g borik asit tartılır ve 1000 ml'ye damıtılmış su eklenir.
(2) Borat Tamponu: 6,87 g boraks ve 5,56 g borik asit tartılır ve 1000 ml'ye damıtılmış su eklenir.
Prosedür:
PHemoglobin Solüsyonunun onarımı
Antikoagülan olarak heparin veya sodyum sitrat içeren 3 ml kan alın. 2000 rpm'de 10 dakika santrifüj edin ve plazmayı atın. Kırmızı kan hücrelerini üç kez fizyolojik salinle yıkayın (750 rpm, her seferinde 5 dakika santrifüj). 2200 rpm'de 10 dakika santrifüj edin ve süpernatantı atın. Eşit miktarda damıtılmış su ekleyin, ardından hacminin 0,5 katı karbon tetraklorür ekleyin. 5 dakika kuvvetlice çalkalayın ve daha sonra kullanmak üzere üst Hb solüsyonunu toplamak için 2200 rpm'de 10 dakika santrifüjleyin.
Membranın Islatılması
Selüloz asetat membranını 3 cm x 8 cm ölçülerinde şeritler halinde kesin. Tamamen doyana kadar pH 8,6 TEB tamponunda bekletin, ardından çıkarın ve filtre kağıdıyla kurulayın.
lekelenme
Kenardan yaklaşık 1,5 cm uzaklıkta, selüloz asetat membranın (pürüzlü taraf) üzerine dikey olarak 10 ul hemoglobin çözeltisini noktalamak için bir pipet kullanın.
Elektroforez
Borat tampon çözeltisini elektroforez odasına dökün. Selüloz asetat membranını benekli tarafı odanın katot ucuna gelecek şekilde yerleştirin. 200 V'ta 30 dakika çalıştırın.
Elüsyon
HbA ve HbA2 bölgelerini kesin, ayrı test tüplerine yerleştirin ve sırasıyla 15 ml ve 3 ml distile su ekleyin. Hemoglobini tamamen ayrıştırmak için hafifçe çalkalayın, ardından karıştırın..
Kolorimetri
Elüsyon çözeltisi için damıtılmış su kullanarak absorbansı sıfırlayın ve absorbansı 415 nm'de ölçün.
Hesaplama
HbA2(%) = HbA2 tüpünün absorbansı / (HbA tüpünün absorbansı × 5 + HbA2 tüpünün absorbansı) × %100
Deneysel Sonuçların Hesaplanması
pH 8,6 TEB Tampon Selüloz Asetat Elektroforezi için Referans Aralığı: HbA > %95, HbA2 %1-%3,1
Notlar
Elektroforez süresi çok uzun olmamalıdır. Elektroforez sırasında selüloz asetat membranın kurumaması gerekir. HbA ve HbA2 açıkça ayrıldığında elektroforezi durdurun. Uzun süreli elektroforez bant difüzyonuna ve bulanıklığa neden olabilir.
Çok fazla örnek kullanmaktan kaçının. Aşırı hemoglobin sıvısı, bandın ayrılmasına veya yetersiz boyamaya yol açarak HbA seviyelerinin yanlışlıkla yükselmesine neden olabilir.
Selüloz asetat membranının proteinlerle kirlenmesini önleyin.
Akım çok yüksek olmamalıdır; aksi takdirde hemoglobin bantları ayrılmayabilir.
Her zaman normal bireylerden alınan numuneleri ve gerekli bilinen anormal hemoglobinleri kontrol olarak ekleyin.
Pekin Liuyi Biyoteknoloji, model olan hemoglobin elektroforezi için profesyonel elektroforez tankını üretmektedir.DYCP-38Cselüloz asetat membran elektroforez tankı ve selüloz asetat membran elektroforez tankı için iki model elektroforez güç kaynağı mevcuttur.DYY-2CVeDYY-6Cgüç kaynağı.
Bu arada, Pekin Liuyi Biyoteknolojisi müşterilere selüloz asetat membranı sağlıyor ve selüloz asetat membranın boyutu özelleştirilebilir. Örnekler ve daha fazla bilgi için bize sormaya hoş geldiniz.
Beijing Liuyi markasının Çin'de 50 yılı aşkın bir geçmişi vardır ve şirket dünyanın her yerinde istikrarlı ve yüksek kaliteli ürünler sunabilmektedir. Yıllar süren gelişim sayesinde seçiminize layık!
Artık ortaklar arıyoruz, hem OEM elektroforez tankı hem de distribütörleri memnuniyetle karşılıyoruz.
Ürünlerimiz için herhangi bir satın alma planınız varsa lütfen bizimle iletişime geçmekten çekinmeyin. Bize e-posta yoluyla mesaj gönderebilirsiniz[e-posta korumalı]veya[e-posta korumalı], veya lütfen +86 15810650221 numaralı telefondan bizi arayın veya +86 15810650221 numaralı Whatsapp'ı veya Wechat'i ekleyin: 15810650221
Gönderim zamanı: Eylül-20-2023